Gelred核酸凝膠染料/核酸染料

Gelred核酸凝膠染料/核酸染料

GelRed and Gelgreen 核酸凝膠染料zui靈敏 , zui穩(wěn)定的核酸凝膠染色試劑，是真正的EB替代產(chǎn)品！由美國BIOTIUM公司技術(shù)專家研發(fā)的GelRed 和GelGreen 是兩種集高靈敏、低毒性和超穩(wěn)定于一身的熒光核酸凝膠染色試劑。其水溶染色劑通過美國環(huán)保局安全認(rèn)定，廢棄物可直接倒入下水道，而不會(huì)造成任何環(huán)境污染。目前大多數(shù)商業(yè)化的核酸染料（凝膠染色試劑）總是在安全性、穩(wěn)定性和靈敏性等方面不令人滿意。例如，雖然 EB （溴化乙啶）作為目前使用zui廣泛的核酸凝膠染色試劑，能夠在多數(shù)應(yīng)用中提供可以接受的靈敏度，但它是一種高誘變性的化學(xué)物質(zhì)。而且EB染色后具有較高的背景熒光信號(hào)（如圖1）。 SYBR Green I 和 SYBR Gold 也被廠家宣傳為zui靈敏的凝膠染色試劑。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會(huì)快速降解，穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果極不可靠。 SYBR safe 被認(rèn)為是市場(chǎng)上較為安全的核酸染料 ，但它的染色效果還遠(yuǎn)不及 SYBR Green I 。至于國內(nèi)有公司宣稱的新產(chǎn)品Goldview，我們不想多加評(píng)論。因?yàn)閺臉O為相似的對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果來看，該產(chǎn)品似乎就是AO（丫啶橙 ，一種judu產(chǎn)品，且熒光亮度不佳）。GelRed核酸染料特性:高靈敏度

GelRed 和 GelGreen 是目前市場(chǎng)中zui靈敏的凝膠核酸染料

穩(wěn)定性好

可以使用微波爐加熱，可以在室溫下保存

更安全

艾姆斯氏試驗(yàn)結(jié)果表明，該染料的誘變性遠(yuǎn)小于 溴化乙錠 （ EB ）

廣泛的適應(yīng)性

適用于預(yù)制凝膠和凝膠電泳后染色

染色過程簡單

與 EB 一樣，在預(yù)制膠和電泳過程中不必?fù)?dān)心染料降解；而電泳后染色過程也只需 30 分鐘且無需脫色或沖洗

對(duì) DNA 和 RNA 的遷移影響極小

對(duì)核酸遷移的影響小于 SYBR Green I

與標(biāo)準(zhǔn)凝膠成像系統(tǒng)以及可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置兼容

使用 312nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)時(shí)， GelRed 可以的替代 EB ；使用 254nm 激發(fā)的 UV 凝膠成像系統(tǒng)或可見光激發(fā)的凝膠觀察裝置時(shí)， GelGreen 足以替代任意一種 SYBR 染料（見圖 4 中的光譜圖）Biotium公司的GelRed 和 GelGreen 無論用于預(yù)制凝膠染色還是凝膠電泳后染色，都表現(xiàn)出了靈敏度。為配合 312 nm UV 凝膠成像系統(tǒng)而設(shè)計(jì)的 GelRed ，在使用了我們新開發(fā)的具有試驗(yàn)步驟后（該試驗(yàn)步驟中使用稀釋的 NaCl 溶液替代傳統(tǒng)的 TBE 緩沖溶液），在凝膠電泳后染色中優(yōu)于或者至少相當(dāng)于 SYBR Gold 。但與 SYBR Gold 不同， GelRed 在預(yù)制凝膠中使用時(shí)仍然有靈敏度，事實(shí)上GelRed 在檢測(cè)低濃度、微量 DNA 方面比 EB 表現(xiàn)出更高的靈敏度，尤其對(duì)小分子量的 DNA 檢測(cè)非常靈敏（圖1）。 GelGreen 可以滿足使用 488 nm 激光凝膠掃描儀或者可見光激發(fā)的 Dark Reader 的研究人員的使用要求。 GelGreen 無論是在預(yù)制凝膠還是凝膠電泳后染色中都與 SYBR Green I 靈敏度相當(dāng)，但不存在后者的不穩(wěn)定性問題。實(shí)際上， GelRed 和 GelGreen ，特別是 GelRed 非常穩(wěn)定，可以長期在室溫下保存。當(dāng)這兩種染料稀釋在 TBE 或者類似的電泳緩沖溶液中時(shí)甚至可以使用微波爐加熱，便于采用常規(guī)方法制備預(yù)制凝膠。含有染料的預(yù)制凝膠可以成批制備，長期保存。同樣重要的是， GelRed 和 GelGreen 相比 EB 或 SYBR Green I 提高了安全性。獨(dú)立的測(cè)試服務(wù)公司（ Litron Laboratories, Inc. ）進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)艾姆斯氏測(cè)試結(jié)果表明， 在 18.5 μ g /mL （該濃度遠(yuǎn)高于推薦用于電泳后染色的 約 4 μ g/mL 的 3X 染色液）濃度下， GelGreen 沒有誘變性，而 GelRed 也僅在 S9 代謝活化時(shí)有微弱的誘變性。 GelRed 和 GelGreen 的特殊化學(xué)結(jié)構(gòu)使其難以穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，正是這一特性降低了染料的細(xì)胞毒性。如圖3。相反， SYBR Green I 廣泛地用于活細(xì)胞線粒體和核 DNA 染色，這正是由于它能快速的被細(xì)胞吞入。由于已知 SYBR Green I 對(duì)紫外線導(dǎo)致的突變有強(qiáng)烈的增強(qiáng)作用（ Ohta et al. Mutat. Res. 492 , 91（2001） ），因此它的高細(xì)胞膜透性使它在紫外環(huán)境觀察時(shí)成為凝膠染色的主要有害物質(zhì)。