免疫組化SP法步驟 SP（streptavidin-perosidase）法,即鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法.
按標記物質(zhì)的種類，如熒光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標法和免疫金銀法等。按染色步驟可分為直接法（又稱一步法）和間接法（二步、三步或多步法）；按結(jié)合方式可分為抗原—抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶（PAP）法和親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC）法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）法等，其中SP法是zui常使用的方法。
一般的sp法步驟啊,具體如下：
1.烤片，68℃，20分鐘,
2. 常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min
3.阻斷 滅活內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS沖洗3X5min；
4. 抗原修復:置0.01M枸櫞酸緩沖液（PH 6.0）中用煮沸（95℃，15－20min），自然冷卻20min 以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封閉，37℃10 min，傾去勿洗.
6. 滴加一抗4℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗3X5min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）；
滴加生物素標記二抗, 37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
7. 滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS沖洗3X5min;
8. DAB/ H2O2反應染色，自來水充分沖洗后，
蘇木素復染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。
|
