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Western Blot條帶總對不齊?可能選錯了蛋白Marker
  • 發(fā)布日期:2025-10-28      瀏覽次數:570
    • 非預染蛋白Marker在電泳過程中看不到,電泳結束后經過蛋白染色后才能起指示作用,無法在實驗過程中起預示作用。

      但是由于蛋白沒有附帶染料分子或者是標記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以最準確。你的Western Blot條帶總對不齊?可能是第一步就選錯了蛋白Marker!

      蛋白Marker主要分為未預染蛋白Marker和預染蛋白Marker兩種,另外還有一些其他類型的蛋白Marker:如顯影蛋白Marker等。

       

      未預染蛋白Marker

      非預染蛋白Marker在電泳過程中看不到,電泳結束后經過蛋白染色后才能起指示作用,無法在實驗過程中起預示作用。但是由于蛋白沒有附帶染料分子或者是標記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以最準確。

       

      預染蛋白Marker

      是純化好的幾種蛋白,通過與染料共價耦聯(lián)后混合在一起,在電泳過程中或者轉膜時可以直接觀察到的一種蛋白Marker。

      預染蛋白Marker又可分為單色預染和多色預染。

      Marker條帶越多參考價值越大,同時也越難區(qū)分,若用不同顏色則容易辨認;單色的Marker通常利用其中某些條帶加倍濃度來提示其大小。

      預染蛋白Marker在電泳過程可以起到預示作用,當觀察目標蛋白大小位置進入最佳分辨區(qū)時,停止電泳,以得到最佳分辨效果。

      轉膜過程可以監(jiān)測轉膜效率,同時可以在膜上標記蛋白分子量。

      但是,預染蛋白Marker與染料共價偶聯(lián),在不同的緩沖條件下,電泳遷移特性可能會發(fā)生某些變化,導致一些偏差。

      也就是說,預染蛋白Marker條帶代表的是相對大小,而不是絕對大小。

       

      顯影蛋白Marker
      顯影蛋白Marker,蛋白條帶中含有IgG結合位點,IgG結合位點會結合用于檢測靶蛋白的一抗或二抗,使得蛋白Marker在印跡膜上可與目的條帶一同呈現。

      通常會有兩個預染條帶,便于動態(tài)觀察蛋白質電泳狀態(tài),判斷轉膜效果和方向;結合抗體后經化學發(fā)光檢測可顯示多個條帶。

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