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免疫熒光技術(shù)的技術(shù)分類有幾種
  • 發(fā)布日期:2023-05-11      瀏覽次數(shù):1206
    • ⑴ 熒光抗體技術(shù)
      抗原抗體反應(yīng)后,利用熒光顯微鏡判定結(jié)果的檢測方法。

      ⑵ 免疫熒光測定
      抗原抗體反應(yīng)后,利用特殊儀器測定熒光強(qiáng)度而推算被測物濃度的檢測方法

      ⑴熒光物質(zhì)
      1)熒光色素
      許多物質(zhì)都可產(chǎn)生熒光現(xiàn)象,但并非都可用作熒光色素。只有那些能產(chǎn)生明顯的熒光并能作為染料使用的有機(jī)化合物才能稱為免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有:

      ⑴異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate,F(xiàn)ITC)為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末,易溶于水或酒精等溶劑。分子量為389.4,最大吸收光波長為490--495nm,最大發(fā)射光波長520--530nm,呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光,結(jié)構(gòu)式如下:
      有兩種同分異結(jié)構(gòu),其中異構(gòu)體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性、與蛋白質(zhì)結(jié)合能力等方面都更好,在冷暗干燥處可保存多年,是應(yīng)用廣泛的熒光素。其主要優(yōu)點(diǎn)是:①人眼對黃綠色較為敏感,②通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。

      ⑵四乙基羅丹明(rhodamine,RIB200)為橘紅色粉末,不溶于水,易溶于酒精和丙酮。性質(zhì)穩(wěn)定,可長期保存。結(jié)構(gòu)式如下:
      最大吸收光波長為570nm,最大發(fā)射光波長為595~600nm,呈橘紅色熒光。

      ⑶四甲基異硫氰酸羅丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate,TRITC)結(jié)構(gòu)式如下:
      最大吸引光波長為550nm,最大發(fā)射光波長為620nm,呈橙紅色熒光。與FITC的翠/綠色熒光對比鮮明,可配合用于雙重標(biāo)記或?qū)Ρ热旧?。其異硫氰基可與蛋白質(zhì)結(jié)合,但熒光效率較低。

      ⑵其他熒光物質(zhì)
      1)酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)某些化合物本身無熒光效應(yīng),一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮,后者可發(fā)出熒光,激發(fā)光波長為360nm,發(fā)射光波長為450nm。

      2)鑭系螯合物某些3價稀土鑭系元素如銪(Eu3 )、鋱(Tb3 )、鈰(Ce3 )等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光,其中以Eu3 應(yīng)用大。Eu3螯合物的激發(fā)光波長范圍寬,發(fā)射光波長范圍窄,熒光衰變時間長,用于分辨熒光免疫測定。

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