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膠原酶的配置和使用
  • 發(fā)布日期:2022-02-25      瀏覽次數(shù):1463
    • 配置

      膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配制、消毒滅菌和儲藏。
      注意:
      因?yàn)棰裥湍z原酶分子顆粒比胰酶大,不容易過濾,因此可以用蔡式濾器過濾除菌。
      鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用,因而可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培養(yǎng)液配制。

      使用

      1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm3左右小塊
      2.將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體積的膠原酶溶液,旋緊蓋子(密封燒瓶)。
      3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nèi),每隔3min振搖一次,如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。
      消化時(shí)間與組織的類別有關(guān),對于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織,消化時(shí)間4~48h,對于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min,也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀,一經(jīng)搖動(dòng)即成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞,可以認(rèn)為已消化充分。上皮組織經(jīng)膠原酶消化后,由于上皮細(xì)胞對此酶有耐受性,可能仍有一些細(xì)胞團(tuán)未*分散,但成團(tuán)的上皮細(xì)胞比分散的單個(gè)上皮細(xì)胞更易生長,因此,如無特殊需要可以不必再進(jìn)一步處理。
      4.收集消化液(有時(shí)含個(gè)別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過濾),離心1000r/min,5min,去除上清,用Hanks液或者無血清培養(yǎng)液離心漂洗1~2次,去除上清,加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液,接種培養(yǎng)瓶。


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